Ovaryum tümörlerinde p53 cDNA mutasyonları

Abstract

Tümör baskılayıcı genler ilk olarak kanserli bir hücreyi normal hücreye dönüştürebilecek genler olarak tanımlanmıştır. Bu tanımlamaya göre tümör baskılayıcı genler, ya kromozomal delesyonlarla kaybedilmiş, yada daha küçük ölçekli mutasyonlarla ( küçük delesyonlar, küçük insertionlar veya nokta mutasyonları ) aktivitesini kaybetmiş genlerdir. Bir tümör baskılayıcı genin inaktive olması genin bir alelindeki ( genin iki kopyasından biri ) bir mutasyonla başlar. Tamamen inaktive olması için diğer alelin de kaybolması gerekir ( ikinci alelde mutasyon veya daha sıklıkla kromozom kaybı ). Eğer kanser kalıtımsal değilse, iki aleldeki iki mutasyon somatik olarak ( somatik hücrelerde ve genellikle doğumdan sonra ) oluşur. İnsan kanserlerindeki rolü en iyi tanımlanmış tümör baskılayıcı gen p53 dür. p53 mutasyonları çoğunlukla p53 proteininin orta kısmını kodlayan eksonlarda meydana gelmektedir. Kodon 132-281 arasında ( ekson 5, 6, 7, 8, 9 ) en fazla mutasyon görülmektedir. p53 bir transkripsiyon faktörüdür; orta bölgesi bu proteinin spesifik olarak DNA'ya bağlanmasını ve hedef genlerinin aktivasyonunu sağlamaktadır. Literatür bilgilerine göre over tümörlerinde en fazla nokta mutasyonunun meydana geldiği, bu mutasyon oranının ise % 30-80 olduğu ve en fazla mutasyonun ekson 5 ile 8 'de meydana geldiği belirtilmektedir. İnsan tümörleri ile ilgili çalışmalarda p53 geni mutasyonlarının genellikle CpG dinükleotidlerindeki transisyon şeklinde bir mutasyon görüldüğü belirtilmiştir. Çalışmamızda 12 tane over tümörü, 10 tane de normal laporoskopik endometrial doku kontrol grubu olarak kullanıldı. Örnekler histopatolojik incelemeden sonra tümör olduğu kesinleşen vakalardan seçildi. Kontrol örnekleri ise hiçbir histopatolojik anormallik görülmeyen vakalardan oluştu. Bütün örnek grupları son üç ay süresince ilaç tedavisi görmemiş 30-55 yaş arası kadınlardan seçildi. Qamp DNA izalasyon kiti ile DNA izolasyonu yapıldı ve standart PCR metodu ile cDNA'lardaki mutasyonlan tarandı. PCR analizi için klontek firmasının standart p53geni aksonları olan ekson 5,6,7,8 ve 9 primerleri kullanıldı. PCR ürünleri % 2'lik agaroz jelde incelendi. Halen çalışmamızda SSCP yöntemi ile nokta mutasyon taraması yapılmaktadır. Yaptığımız çalışmada 12 adet over tümörünün 7 tanesinde mutasyona görüldü. Kontrol grubu üyelerinin hiçbirinde mutasyon görülmedi. Bu sonuçlar x fısher istatistik yöntemiyle test edildi. Over tümörleriyle kontrol grubu arasında bulunan p değerimiz (X2) = 0,0054, p< 0,05 olduğundan anlamlı bir fark bulunmuştur. Anahtar Kelimeler : Tümör baskılayıcı genler, p53, ovaryum tümörleri.